WB技術(shù)服務(wù)，WB實(shí)驗(yàn)代測

更新時間：2016-03-07

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簡介：Western blot（免疫印跡實(shí)驗(yàn)）實(shí)驗(yàn)服務(wù)

提供商：南京信帆生物技術(shù)有限公司

服務(wù)名稱：Western blot實(shí)驗(yàn)服務(wù)

服務(wù)名稱	標(biāo)本要求	實(shí)驗(yàn)周期	單位
WB（普通蛋白）	組織、蛋白、細(xì)胞	2周內(nèi)	每張膜

Western blot簡介

蛋白質(zhì)印記又稱免疫印記，根據(jù)抗原抗體的特異性結(jié)合檢測樣品中的某種蛋白的方法。它是利用特異性抗體對凝膠電泳處理過的細(xì)胞或生物組織樣品進(jìn)行著色，通過分析著色的位置和著色深度獲得特定蛋白質(zhì)在所分析的細(xì)胞或組織中表達(dá)情況的信息。

Western blot的原理

Western Blot法采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE(聚丙烯酰胺凝膠電泳)分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。

以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。

Western blot樣本要求

客戶需新鮮或正確保存的蛋白樣品，檢測目的蛋白的一抗（或由本公司代購）。樣品要求為：

1、裂解樣品總蛋白量>500ug/樣品。

2、細(xì)胞樣品總蛋白濃度>1mg/ml。

3、組織樣品總蛋白濃度>10-15mg/ml。

Western blot結(jié)果及數(shù)據(jù)提供

內(nèi)參蛋白和目的蛋白曝光膠片各一張，可提供掃描圖，實(shí)驗(yàn)報告，包括整個試驗(yàn)流程所涉及的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)和實(shí)驗(yàn)步驟。如需進(jìn)行蛋白純化服務(wù)，將提供檢測報告

Western blot實(shí)驗(yàn)服務(wù)

服務(wù)內(nèi)容

我們提供從蛋白制備、蛋白電泳到Western blot檢測的全流程服務(wù)，如需要還可進(jìn)行灰度分析。

說明

1、建議提供目的蛋白陽性表達(dá)樣品（純蛋白或有陽性表達(dá)的細(xì)胞或組織）作為陽性對照。

2、每張膜檢測1-8個樣品。

3、如果一抗由客戶提供，請在正確條件下保存，避免污染及反復(fù)凍融。

關(guān)于Western blot實(shí)驗(yàn)異常分析

『無信號』

原因	建議
一抗與二抗不匹配	選擇針對一抗來源種屬制備的二抗；
一抗不識別目的的種屬的蛋白	1)檢查抗體的說明書，適用范圍內(nèi)是否包含目的種屬 2)使用陽性對照來檢查抗體質(zhì)量
一抗或二抗不足，沒有足夠的抗體結(jié)合到目的蛋白	1)降低抗體稀釋倍數(shù)，增加抗體濃度 2)延長孵育時間
封閉劑與一抗有交叉反應(yīng)	改變封閉劑
抗原不足	1)每個泳道加入20-30ug總蛋白 2)制備樣品要使用蛋白酶抑制物及使用陽性對照
在檢測的組織內(nèi)目的蛋白表達(dá)水平低	檢測樣本不表達(dá)目的蛋白選擇表達(dá)量高的細(xì)胞作為陽性對照，用于確定檢測樣本是否為陰性，也可更換細(xì)胞系
蛋白轉(zhuǎn)膜效率低	1)利用麗春紅檢測轉(zhuǎn)膜效率;檢查轉(zhuǎn)移裝置是否電極弄反 2)轉(zhuǎn)移前膜是否用甲醇侵泡過
膜過渡洗滌	減少洗滌時間和強(qiáng)度
疊氮鈉抑制二抗活性	二抗稀釋液內(nèi)不用疊氮鈉

『沒有特異條帶』

原因	建議
細(xì)胞系傳代過多后蛋白表達(dá)譜發(fā)送變化	1)使用未傳代或傳代次數(shù)較少的細(xì)胞系進(jìn)行樣品制備
蛋白本身有很多修飾	1)查閱文獻(xiàn)，確定目的蛋白是否存在多種修飾
蛋白被消化或者降解	1)蛋白樣品確保未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
所檢測蛋白存在多種剪接體，導(dǎo)致分子量大小不同	1)查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA
一抗或二抗?jié)舛雀?/span>	1)減低抗體濃度
洗滌不夠	1)充分洗滌

『條帶大小不正確』

原因	建議
目的蛋白被降解	確保蛋白樣品未被污染，確保含有蛋白酶抑制劑
存在不同的剪接體	查閱文獻(xiàn)或者通過搜索數(shù)據(jù)庫來確定該蛋白是否存在多種長度不同的編碼mRNA
重組蛋白	檢測是否存在額外加入的蛋白
特殊蛋白如MDM2等	仔細(xì)閱讀抗體說明書

尊敬的客戶：
本公司有放射免疫技術(shù)服務(wù)、蛋白質(zhì)組學(xué)服務(wù)、免疫組化、PCR技術(shù)服務(wù)、生物信息學(xué)數(shù)據(jù)分析等，如果您想了解Western blot的更多內(nèi)容或者其他服務(wù)信息，您可以本公司的了解更多產(chǎn)品的詳細(xì)信息，至善至美的服務(wù)是我們永無止境的追求，歡迎新老客戶放心選購自己心儀產(chǎn)品，我們將竭誠為您服務(wù)！