人卵巢癌抗原（CA125）檢測(cè)原理

背景介紹：

CA-125（癌抗原-125或糖鏈抗原-125），也被稱為粘蛋白-16，是被MUC16基因所編碼的蛋白質(zhì)，是從上皮性卵巢癌抗原檢測(cè)出可被單克隆抗體OC125結(jié)合的一種糖蛋白。來源于胚胎發(fā)育期體腔上皮，在正常卵巢組織中不存在。CA125是一種位于染色體19p13．2區(qū)域，并含有5797個(gè)堿基對(duì)的跨膜糖蛋白，屬于IgG1。由于其氨基酸序列具有一些黏蛋白分子的特性，故將其命名為CA125（基因?yàn)镸UC16），而且通過轉(zhuǎn)染技術(shù)已經(jīng)證實(shí)MUC16就是CA125。CA125相對(duì)分子質(zhì)量為20萬～100萬，為高分子糖蛋白，外形呈環(huán)行結(jié)構(gòu)，含24%的糖類，是一種類似黏蛋白的糖蛋白復(fù)合物，屬于IgG。

檢測(cè)原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）。往預(yù)先包被人卵巢癌抗原（CA125）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人卵巢癌抗原（CA125）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度（OD 值），計(jì)算樣品濃度。

操作注意:

1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。所有液體組分使用前充分搖勻。

2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過程中不要讓微孔干燥掉。

3. 消除板底殘留的液體和手指印，否則影響OD值。

4. 底物顯色液應(yīng)呈無色或很淺的顏色，已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。

5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。

6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。

7. 平衡至室溫后再打開密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。

8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。

9. 不能使用過期產(chǎn)品。

10. 如果樣本可能傳播疾病，所有的樣品都應(yīng)管理好，按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置。

試劑盒性能

1. 檢測(cè)范圍：2 U/mL – 64 U/mL。

2.  靈敏度：最低檢測(cè)濃度小于0.1 U/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。

 重復(fù)性：板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ，板間變異系數(shù)小于15%